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La ville connaît une croissance exponentielle pendant la première moitié du XIVe siècle, période d’expansion politique et économique de la principauté, et devient en 1326 la capitale religieuse du pays, lorsque le métropolite de l’Église orthodoxe russe transfère son siège de Vladimir à Moscou. Incendiée par les Tatars en 1382, elle reprend toutefois son essor qui lui permet d’être choisie comme capitale politique par le grand duc Ivan III le Grand (1462-1505), qui unifie les principautés russes. Il est généralement considéré qu'Ivan III libéra finalement la ville du contrôle mongol en 1480, l'élevant au rang de capitale d'un empire. Du XIVe au XVIIe siècle, Moscou se dote de fortifications et sa localisation stratégique lui offre un rôle d’importance parmi les puissances européennes dans les domaines du commerce et de la diplomatie. Entre 1610 et 1612 des troupes polonaises occupèrent Moscou comme la Pologne tentait sans succès d'installer un monarque sur le trône ou de constituer une union entre les États slaves. Cependant l'armée polonaise n'était que partiellement soutenue par l'aristocratie et son équivalent russe menée par le prince Pojarski obtint l'élection de Michel Romanov.
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